收到細胞后,檢查外包裝是否完整,細胞培養瓶是否完好。 如有破損漏液等問題,請即時聯系。
并進行以下操作:
1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養瓶外部。
2. 將細胞放入37度培養箱中預溫3-4小時后再做處理,以穩定細胞狀態。
3. 預熱培養基(含10%胎牛血清,1%雙抗)。
4. 顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照保存(40×,100×,200×各一張)。
5. ①若細胞密度較小,無菌操作,去掉培養基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養基。放到37度培養箱培養。待細胞密度達到80%以上,進行傳代
②若細胞密度較大,達到80%以上,將細胞傳代培養。 注:培養瓶里的培養基血清濃度為5%,建議更換成自己配好的新鮮培養基。由于運輸過程中的問題,細胞培養瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會出現細胞懸浮的情況。 這時請在拍照后將懸浮的細胞即時離心,加15%血清的培養基到新的培養皿/瓶繼續培養3天;同時原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的培養基。(這里是針對原來培養基FBS濃度是10%的情況,如果原來FBS濃度是20%,可以增加到25%FBS濃度)
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